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BCA蛋白定量試劑盒在使用中不受樣本雜質(zhì)影響
發(fā)布日期：
2019-09-11
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BCA蛋白定量試劑盒是一種靈敏并且抗干擾能力強(qiáng)的蛋白定量檢測(cè)試劑盒。蛋白質(zhì)在堿性條件下能夠?qū)?Cu2+還原為Cu+，BCA (Bicinchoninic acid)與 Cu+螯合形成紫藍(lán)色螯合物，通過(guò)測(cè)定螯合產(chǎn)物在562nm 的吸光度值，即可對(duì)蛋白濃度進(jìn)行定量。BCA法與傳統(tǒng)方法相比，更簡(jiǎn)單、更穩(wěn)定、更靈敏度。BCA法測(cè)定蛋白濃度兼容性亦很好，不受大部分樣本中其他成分的影響。
1、蛋白標(biāo)準(zhǔn)(BSA)粉末溶解于蛋白標(biāo)準(zhǔn)配制液后，即獲得蛋白標(biāo)準(zhǔn)原液，該原液中含有防腐劑，不影響后續(xù)檢測(cè)，該蛋白標(biāo)準(zhǔn)原液-20℃長(zhǎng)期保存。
2、待測(cè)蛋白溶解于什么樣的稀釋液中，蛋白標(biāo)準(zhǔn)也宜溶解于什么樣的稀釋液中，否者待測(cè)蛋白與蛋白標(biāo)準(zhǔn)中所含非蛋白成分不一致，有可能導(dǎo)致測(cè)定不準(zhǔn)確。
3、如果檢測(cè)效果不佳，可以室溫放置2h或60℃放置30min，顏色會(huì)隨著時(shí)間的延長(zhǎng)不斷加深。顯色反應(yīng)也會(huì)隨溫度升高而加快；如果濃度較低，可以適當(dāng)延長(zhǎng)孵育時(shí)間或在較高溫度下孵育。
4、測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)發(fā)現(xiàn)隨著標(biāo)準(zhǔn)品濃度的增加吸光度或顏色沒(méi)有明顯變化，可能的原因是樣品中含有嚴(yán)重干擾BCA法測(cè)定蛋白濃度的物質(zhì)。
5、BCA法檢測(cè)中樣本中不應(yīng)含有EGTA，否則影響檢測(cè)結(jié)果。
6、因BCA法測(cè)定時(shí)顏色會(huì)隨著時(shí)間的延長(zhǎng)不斷加深，建議每次測(cè)定時(shí)都做標(biāo)準(zhǔn)曲線，并且顯色反應(yīng)的速度和溫度有關(guān)，所以除非控制顯色反應(yīng)的時(shí)間和溫度，否則每次都做標(biāo)準(zhǔn)曲線。
7、如果沒(méi)有酶標(biāo)儀，也可以使用普通分光光度計(jì)測(cè)定，但應(yīng)考慮根據(jù)比色皿的小檢測(cè)體積。應(yīng)按比例適當(dāng)加大BCA工作液的用量使總體積不小于小檢測(cè)體積，樣品和標(biāo)準(zhǔn)品的用量亦相應(yīng)按比例放大；使用分光光度計(jì)測(cè)定蛋白濃度時(shí)，可以測(cè)定的樣品數(shù)量可能會(huì)顯著減少。
8、為了加快BCA法測(cè)定蛋白濃度的速度可以適當(dāng)加熱，但是切勿過(guò)熱，否則易失效。
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